￠ 產(chǎn)品規(guī)格

￠ 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

   BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法?；陔p縮脲反應(yīng)，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu²⁺還原成Cu⁺，Cu⁺與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，在562 nm處有高的吸光值，該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。測(cè)定其在562 nm處的吸光值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。該方法快速靈敏、穩(wěn)定可靠且對(duì)不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)很小。試劑盒中提供了濃度穩(wěn)定的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

   BCA 蛋白定量試劑盒可用于試管法檢測(cè)，也可用于微孔板法檢測(cè)。試管法需較大量蛋白樣品(100 μL)和工作液(2 mL)，蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為1:20(v/v)，蛋白質(zhì)測(cè)定范圍為20-2000 μg/mL，采用加強(qiáng)法可以檢測(cè)到 5 μg/mL；微孔板法操作簡(jiǎn)單方便，僅需少量(10-25 μL)的蛋白樣品和工作液(200 μL)，蛋白樣品與工作液的比率為1:20(v/v)或者1:8(v/v），蛋白質(zhì)測(cè)定范圍為 20-2000 μg/mL，采用加強(qiáng)法可以檢測(cè)到 5 μg/mL。

本試劑盒，含預(yù)配制標(biāo)準(zhǔn)品，無(wú)需繁瑣稀釋操作。使用比色皿法可進(jìn)行 50 次檢測(cè)，使用酶標(biāo)法可進(jìn)行 500 次檢測(cè)。

￠ 保存條件

常溫運(yùn)輸。4℃保存，有效期12個(gè)月。

￠ 使用說(shuō)明

一、配制工作液

1. 配制 BCA 工作液

(1) 計(jì)算所需要的總 BCA 工作液體積?？?BCA 工作液體積=（標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量+待測(cè)樣品數(shù)量）x 重復(fù)數(shù) x 每個(gè)樣品所需要的 BCA 工作液。

注：試管法檢測(cè)時(shí)每個(gè)樣品加 2.0 mL BCA 工作液，微孔板檢測(cè)每個(gè)樣品加 200 μL BCA 工作液。 

(2) 配制 BCA 工作液：50 體積的 BCA 試劑 A 中加入 1 體積的 BCA 試劑 B（A:B=50:1），充分混勻。

注：BCA 工作液裝入密封容器內(nèi)，室溫條件 24h 穩(wěn)定。 

二、檢測(cè)方法

1. 試管檢測(cè)方法（樣品:BCA 工作液=1:20） 

(1) 各取 100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到反應(yīng)管中。

(2) 每管加入 2.0 mL BCA 工作液，混勻。根據(jù)待測(cè)樣品的濃度范圍選擇孵育時(shí)間和溫度。

標(biāo)準(zhǔn)孵育方法：37℃ 孵育 30 min 或者室溫 2h；增強(qiáng)孵育方法：60℃ 孵育 30 min。

注：BCA 檢測(cè)蛋白濃度，延長(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)加深顏色反應(yīng)。升高溫度會(huì)加快顯色反應(yīng)，但是溫度升高和時(shí)間延長(zhǎng)會(huì)降低檢測(cè)下限，以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。 

(3) 冷卻到室溫。在分光光度計(jì)上進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)定波長(zhǎng)為 562 nm，在 10 min 內(nèi)對(duì)所有樣品讀數(shù)。

注：由于 BCA 反應(yīng)達(dá)不到真正的反應(yīng)終點(diǎn)，即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會(huì)繼續(xù)。但是，由于室溫下生色比率相當(dāng)?shù)停虼巳羰?10 min 內(nèi)能對(duì)所有的樣本進(jìn)行 562 nm 吸光度的測(cè)試，不會(huì)導(dǎo)致明顯錯(cuò)誤。 

(4) 根據(jù) BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的 OD 值即最終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的 OD 562nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。

2. 微孔板檢測(cè)方法（樣品: BCA 工作液=1:20）

(1) 各取 10 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到微孔板中。

注：樣品與工作液比例為 1:20，檢測(cè)范圍為 125-2000μg/mL。若樣品濃度非常低，可使用 25μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)（即 1:8），這時(shí)試劑盒的檢測(cè)范圍為 20-2000 μg/mL。 

(2) 每孔加入 200 μL BCA 工作液，槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板，37℃ 孵育 30 min。

(3) 冷卻到室溫，在酶標(biāo)儀上的 562 nm 波長(zhǎng)范圍處檢測(cè)吸光度。

(4) 根據(jù) BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的 OD 值即最終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（ X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的 OD 562nm）。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。

￠ 注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

3. 對(duì)樣品進(jìn)行適度稀釋，可設(shè)置 2 倍、4 倍、8 倍等多個(gè)梯度，稀釋液是去離子水或者 PBS。

4. 若測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)無(wú)梯度變化，表明存在 BCA 法檢測(cè)干擾物。