￠ 產(chǎn)品簡介：

BLT DiD是一類長鏈的親脂性熒光染料，DiI的類似物。用于標記細胞膜以及其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)（例如外泌體），激發(fā)后呈遠紅外熒光。其在水中熒光強度很弱，與細胞膜結(jié)合或者與親脂性生物分子結(jié)合時，其熒光強度顯著增強。DiD通常不會明顯影響細胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

￠ 產(chǎn)品基本參數(shù)：

別稱：BLT DiD，DiIC18(5)

分子量（g/mol）：~1052

形態(tài)：固體粉末

純度：95+%

溶劑：DMSO/DFM/EtOH

激發(fā)波長：644 nm

發(fā)射波長：665 nm

￠ 保存條件：

避光干燥保存；粉末狀態(tài)： -20 °C，有效期二年。溶液狀態(tài)： -20 °C，有效期一年；

￠ 使用方法：

1. 染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：用DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM的儲存液。儲存液分裝儲存在-20 ℃或-80 ℃，避免反復凍融。

（2）工作液制備：根據(jù)染色體系用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。最佳染色的工作液濃度與細胞系和實驗體系有關，可多次嘗試染色實驗優(yōu)化，且工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2. 懸浮細胞染色

（1）加入適當體積（300 μL）的染色工作液重懸細胞，染色細胞濃度可嘗試1×10⁶/mL。

（2）孵育細胞：在室溫或37 ℃環(huán)境避光孵育細胞，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。建議首次孵育細胞20 min，之后可優(yōu)化孵育時間，以得到均一的標記結(jié)果。

（3）清洗多余染料：孵育結(jié)束，以1000～1500 rpm離心細胞5 min，去除上清液，用緩沖液重復清洗操作三次，注意緩慢操作。

3. 貼壁細胞的染色

（1）將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

（3）在蓋玻片的一角加入適當體積（300 μL）的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

（4）以相同懸浮細胞的孵育條件進行孵育，及孵育時間優(yōu)化。

（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液或緩沖液清洗蓋玻片3次以上。

注：本方案僅供參考，具體實驗條件請研究人員依據(jù)自身項目進行優(yōu)化。

4. 外泌體的染色

（1）用PBS稀釋存儲液，配制濃度為 50-100 μM 的染料工作液，建議加入外泌體懸浮液體積的1/10體積的染料工作液（如1mL內(nèi)含100μL工作液）。

（2）加入染料工作液后將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器混勻 1 min，再放置于 37 °C避光孵育 30 min。

注：染色條件和外泌體濃度有關，可多次嘗試染色濃度和時間實驗優(yōu)化。

（3）向孵育后的外泌體-染料復合物中加入10 mL的1X PBS混勻，按照外泌體提取方法（離心或其他）再次提取外泌體，以去除多余染料，重懸沉淀物，沉淀即為染色后的外泌體。

5. 檢測條件

DiD可被633nm的氦-氖(He-Ne)激光所激發(fā)。

附表：

￠ 注意事項:

1．為了您的自身安全，實驗前請做好有效防護；

2．最佳染色的工作液濃度與細胞系和實驗體系有關，可多次嘗試染色實驗優(yōu)化，且工作液現(xiàn)配現(xiàn)用；

3．本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！