產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品簡介

  膠原酶IV ( Collagenase IV) 來源于溶組織梭菌 (Clostridium histolyticum )，是一種蛋白酶，能夠特異性的識別 Pro-X-Gly-Pro 序列并切割該序列中性氨基酸 (X) 和甘氨酸 (Gly) 之間的肽鍵，并且這種序列在膠原中出現(xiàn)的頻率很高。該膠原酶產(chǎn)物是由溶組織梭菌所分泌的酶混合物組成，主要的成分是兩種膠原酶、梭菌蛋白酶和一種中性蛋白酶和低胰蛋白酶，可以降解廣泛存在于結(jié)締組織中的具有三股螺旋的天然膠原纖維的蛋白酶，在生物學(xué)研究中具有廣泛的用途，它可用于制備分離的細(xì)胞懸浮液。該產(chǎn)品適用于人類腫瘤、小鼠腎臟、人類成人和胎兒腦、肺和許多其他上皮組織的解聚。它還被證明可有效用于肝臟和腎臟灌注研究、胰腺消化、非實質(zhì)大鼠肝細(xì)胞的分離以及肝細(xì)胞的制備。

  膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應(yīng)用上有所偏向：1）膠原酶I（Collagenase I）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性）。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備; 2）膠原酶II（Collagenase II）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備; 3）膠原酶III（Collagenase III）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細(xì)胞的制備; 4）膠原酶IV（Collagenase IV）：含有低胰酶活性，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實驗。

  本品為 IV 型膠原酶( Collagenase IV)，≥125 U/mg solid，具有低胰酶活性，特別適用于胰島細(xì)胞制備。

保存條件

  凍干粉狀態(tài)，2-8 °C避光保存，有效期2年；儲存液-25~-15°C避光凍存，避免反復(fù)凍融；

使用方法

 一. 酶活力單位

  1個酶活力單位指在 37 ℃，pH 7.5 的條件下，5 h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生1 μmol/L 亮氨酸所需的酶量；本品≥125 U/mg solid

 二. 生化/生理作用

  每摩爾膠原蛋白酶被4g原子鈣活化，可被乙二醇-雙（β-氨基乙基醚）-N，NN′,N′-四乙酸，β-巰基乙醇、谷胱甘肽、巰基乙酸和8-羥基喹啉抑制。

 三. 使用示例

1，膠原酶儲存液的配制

1)      向每管100 mg 的膠原酶中加入1 mL 的相應(yīng)緩沖液（根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定），如 HBSS (Hank's 平衡鹽 溶液，含 Ca²⁺ 、Mg²⁺ ) 等，輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成 100 mg/mL ( 即 100×) 的儲存液。

2)      用低蛋白結(jié)合性的 0.22 μm 的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，于 -20 ℃避光凍存。使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5~2.5 mg/mL，用于軟骨消化的常用濃度為 1~2 mg/ mL，需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。

2，組織的分離

1)      使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成 3~4 mm 大小的組織塊；

2)      使用相應(yīng)緩沖液（如 HBSS ）洗滌組織塊數(shù)次；

3)      加入足量的緩沖液，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要的工作濃度；

4)      于 37 ℃孵育 4~18 h，消化時使用水平搖床以及用 3 mM 的 CaCl₂ 補充消化可以提高消化效率；

5)      已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37 ℃繼續(xù)孵育；

6)      使用不含膠原酶的緩沖液洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；

7)      細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動細(xì)胞計數(shù)器或其他方法計算活細(xì)胞密度；

8)      于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

3，器官灌注

1)      37℃預(yù)熱的相應(yīng)緩沖液（如 HBSS）中加入膠原酶，另添加 3 mM 的 CaCl₂ 有助于提高分離效率；

2)      按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；

3)      將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團塊分離開來，未充分解離的組織 需利用新鮮膠原酶工作液于 37℃進(jìn)一步孵育；

4)      使用不含膠原酶的緩沖液洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；

5)      使用細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動細(xì)胞計數(shù)器或其他方法計算活細(xì)胞密度；

6)      于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

注意事項

  1) 為了您的自身安全，實驗前請做好有效防護；

  2) 本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！