產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品簡介

DNA 片段分選純化磁珠基于SPRI (Solid Phase Reversible Immobilization )原理，采用高結(jié)合能力、快速磁響應(yīng)力、低沉降速度的納米磁珠和特制的緩沖液體系，可用于核酸純化，也可通過不同的加樣比例從混合核酸樣本中分離純化出目標(biāo)大小范圍內(nèi)的核酸片段，整個(gè)操作過程安全，方便快速，回收率高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，其回收的核酸片段可用于二代測序平臺的文庫構(gòu)建。

  本產(chǎn)品適合于回收 100 bp-5 kb 片段范圍內(nèi)的純化和分選，可手工實(shí)驗(yàn)操作，也可應(yīng)用在基于自動化移液工作站的高通量實(shí)驗(yàn)操作，可完美替代 Beckman AMPure XP。

保存條件

2-8 °C保存，有效期18個(gè)月；

使用方法

自備儀器和試劑

1)      80%(V/V)乙醇溶液（最好使用新鮮配置的）；

2)      洗脫緩沖液：TE Buffer（10 mM Tris-HCl, pH 8.0，1 mM EDTA）或去離子水；

3)      漩渦振蕩器；

4)      磁性分離器：可選用96孔磁性分離器；

注：DNA樣本體積需≥50 μL。過小的體積會降低移液的準(zhǔn)確度，從而影響篩選范圍的準(zhǔn)確度；提前半小時(shí)將 DNA片段篩選試劑從 4 ℃取出，使其溫度平衡至室溫.

1. 核酸純化：回收大于 100 bp 的全部核酸

  1)  將平衡至室溫的DNA樣本，渦旋充分混勻，取待純化樣本體積 1.8倍的試劑加入樣本中（例如待純化樣本 50 μL，加入試劑 90 μL），渦旋或用吸頭反復(fù)吹吸混勻，室溫靜置 10 min；注：樣本量×比率=磁珠懸液加入量，如50 μL樣本×1.8=90 μL磁珠懸液。

  2) 置于磁力架上 2 min 或至溶液澄清，用移液器吸去上清（避免吸到磁珠）；

  3) 去掉磁力架，加入 200 μL 80% 乙醇，渦旋或用吸頭反復(fù)吹吸重懸磁珠；置于磁力架上至溶液澄清，用移液器吸去上清（避免吸到磁珠），重復(fù)操作二次；最后一次用 10 μL 吸頭吸去多余上清（避免吸到磁珠）注：最后一次洗滌后應(yīng)盡可能移除干凈洗滌液；

  4) 將離心管置于磁力架上，室溫開蓋晾干約 3 min；注：過度干燥磁珠會導(dǎo)致回收率降低，表面有裂紋即代表干燥過度；

  5) 去除磁力架，加入10 ~ 50 μL去離子水或 TE Buffer 反復(fù)吹打數(shù)次，充分混勻重懸磁珠，室溫靜置 5 min；再將離心管置于磁力架上2min至溶液變澄清，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，可直接用于后續(xù)研究或者短暫保存可置于 4℃，長期保存置于 -20℃。注：用戶可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整洗脫液體積。

2. 片段分選

根據(jù)所需目的片段的分布范圍，按下表進(jìn)行兩輪純化，第一輪用磁珠去除目標(biāo)范圍外的大片段，第二輪補(bǔ)加對應(yīng)體積的試劑，讓磁珠與目標(biāo)范圍內(nèi)的核酸結(jié)合，從而分離出特定片段大小范圍的核酸。

0.60×/0.80×為例的操作步驟

1)      將平衡至室溫的DNA樣本，渦旋充分混勻，取待純化樣本體積 0.6倍的試劑加入樣本中（例如待純化樣本 50 μL，加入試劑 30 μL），渦旋或用吸頭反復(fù)吹吸混勻，室溫靜置 10 min；注：第一次磁珠加入量：樣本量×比率=磁珠懸液加入量，如50 μL樣本×0.6=30 μL磁珠懸液。

2)      置于磁力架上 2 min 或至溶液澄清，用移液器吸去上清（避免吸到磁珠）

3)      取樣本體積 0.2 倍的試劑（例如起始待純化樣本 50 μL，加入試劑 10 μL），加入步驟 2 上清中，渦旋吹吸混勻，室溫靜置 10 min。注：第二次磁珠加入量：樣本量×比率=磁珠懸液加入量，如50 μL樣本×0.2=10 μL磁珠懸液。

4)      去掉磁力架，加入 200 μL 80% 乙醇，渦旋或用吸頭反復(fù)吹吸重懸磁珠；置于磁力架上至溶液澄清，用移液器吸去上清（避免吸到磁珠），重復(fù)操作二次；最后一次用 10 μL 吸頭吸去多余上清（避免吸到磁珠）注：最后一次洗滌后應(yīng)盡可能移除干凈洗滌液；

5)      將離心管置于磁力架上，室溫開蓋晾干約 3 min；注：過度干燥磁珠會導(dǎo)致回收率降低，表面有裂紋即代表干燥過度；

6)      去除磁力架，加入10 ~ 50 μL去離子水或 TE Buffer 反復(fù)吹打數(shù)次，充分混勻重懸磁珠，室溫靜置 5 min；再將離心管置于磁力架上2min至溶液變澄清，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，可直接用于后續(xù)研究或者短暫保存可置于 4℃，長期保存置于 -20℃。注：用戶可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整洗脫液體積。

注意事項(xiàng)

  1) 磁珠懸液應(yīng)在2 ~ 8℃ 保存與運(yùn)輸，在保存過程中應(yīng)嚴(yán)格避免冷凍、離心等操作。

  2) 建議使用質(zhì)量好的移液器吸頭和反應(yīng)管，避免因粘附磁珠及溶液而造成損失，從磁珠保存管中移取磁珠前應(yīng)充分震蕩重懸均勻。

  3) 磁珠洗脫前應(yīng)徹底去除洗滌液，避免殘留乙醇影響 DNA洗脫效率。

  4) 請勿長時(shí)間干燥磁珠，以免引起不可逆的磁珠聚集以及降低核酸洗脫效率。

  5) 樣本與加入試劑的體積比直接影響目標(biāo)片段的分選結(jié)果，加入試劑前建議用移液器等確認(rèn)樣本體積。

  6) 樣品中pH，其他鹽離子，PEG等成分，會影響最終片段分選效果。如按建議篩選比率，需是不含影響篩選成分的，例如溶解在超純水、Tris、TE等。其他溶液，可根據(jù)具體情況進(jìn)行篩選比率的調(diào)整。

  7) 為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請做好有效防護(hù)；

  8) 本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！