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產(chǎn)品規(guī)格

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

售價(元)

BLT Trans-D細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

TD001

50 μL

250

TD002

0.75 mL

890


產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品Trans-D細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑為新一代的陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,專用于質(zhì)粒DNA的遞送??蛇m用眾多易轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的DNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染,及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的構(gòu)建。此轉(zhuǎn)染試劑經(jīng)驗證在常規(guī)細(xì)胞如Hela,293T、COS7、CHO和B16F10等具有較高的轉(zhuǎn)染效率,對原代細(xì)胞,干細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞也具有較高的轉(zhuǎn)染效率,與其它轉(zhuǎn)染試劑相比,具有不受血清影響、毒性低、穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)染簡單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點。


保存條件

常溫或冰袋(wet ice)運輸;2-8 °C保存,有效期一年不可冷凍)。


轉(zhuǎn)染實例對比



使用說明

DNA轉(zhuǎn)染(以24孔板為例):

1)細(xì)胞培養(yǎng):在轉(zhuǎn)染前一天(12-24小時)按照每孔約0.5~1.0*105個細(xì)胞接種到孔板內(nèi)進行培養(yǎng),使第二天細(xì)胞密度能達到約60-80%

注:具體的細(xì)胞數(shù)量根據(jù)孔板類型,細(xì)胞類型和細(xì)胞生長速度等而定,保證細(xì)胞融合度在60%以上。

2)質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物形成:按照下表對質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑用無血清培養(yǎng)基或者 Opti-MEM 培養(yǎng)基分別進行稀釋,然后將稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,輕輕混勻,室溫復(fù)合10-15 min,混合順序不可反向進行。

注:稀釋液需保證無抗生素和無血清,復(fù)合物的形成過程不能含有血清。


96-Well

48-Well

24-Well

12-Well

6-Well

6cm dish

10cm dish

培養(yǎng)液體積

0.2 mL

0.3 mL

0.5 mL

0.75 mL

1 mL

3 mL

9 mL

稀釋液體積

10 μL

25 μL

40 μL

60 μL

0.125 mL

0.25 mL

0.5 mL

DNA/質(zhì)粒用量

0.2 μg

0.5 μg

1.0 μg

1.5 μg

3.0 μg

3.0 μg

6.0 μg

轉(zhuǎn)染試劑用量

0.6 μL

1.5 μL

3.0 μL

4.5 μL

9.0 μL

18.0 μL

36.0 μL

24孔板為例:①將1.0 μg質(zhì)粒加入無血清培養(yǎng)液稀釋至40 μL;②3.0 μL轉(zhuǎn)染試劑加入無血清培養(yǎng)液稀釋至40 μL;③稀釋好的轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中,室溫靜置10-15 min

復(fù)合物加入總量

2×10 μL

2×25 μL

2×40 μL

2×60 μL

2×0.125 mL

2×0.25 mL

2×0.5 mL

注:該表使用量僅供參考,具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實驗條件進行優(yōu)化,對于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞可通過改變細(xì)胞密度,DNA濃度,轉(zhuǎn)染試劑濃度對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化,轉(zhuǎn)染試劑(μL)DNA(μg)可以在2:15:1之間調(diào)整。

3)轉(zhuǎn)染培養(yǎng):將上述80 μL復(fù)合物均勻加入到24孔板中,輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩,繼續(xù)培養(yǎng)18-48小時后檢測轉(zhuǎn)染效率,無需更換培養(yǎng)基。

4)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株:轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細(xì)胞24 h后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋10倍以上),在37 °C,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h,加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下,約12周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

 

注意事項

1.為了您的自身安全,實驗前請做好有效防護;

2.形成的轉(zhuǎn)染復(fù)合物勿離心,若想將粘附管壁復(fù)合物離心,請務(wù)必極低轉(zhuǎn)速離心,如50g離心5s;

3.為保證較高的轉(zhuǎn)染效率,請使用高純度、無菌、無污染物的質(zhì)粒進行轉(zhuǎn)染,通過260 nm光吸收測定DNA濃度,260 nm/280 nm 比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.82.0的范圍之內(nèi);

4.轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是,制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,轉(zhuǎn)染時培養(yǎng)液中不添加抗生素;

5.本品為DNA質(zhì)粒的專用轉(zhuǎn)染試劑,也可以用于RNA的轉(zhuǎn)染,但對RNA的轉(zhuǎn)染的條件需要摸索,如有需要訂購RNA專用轉(zhuǎn)染試劑;

6.本產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)!







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