產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 售價(jià) |
螢火蟲熒光素酶檢測(cè)試劑盒 Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit | FLK001 | 100T | ￥500.00 |
螢火蟲熒光素酶檢測(cè)試劑盒 Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit | FLK002 | 500T | ￥1000.00 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為 61 kDa 的蛋白，在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化熒光素（luciferin）氧化成 oxyluciferin，在 luciferin 氧化的過程中會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)為 560 nm 左右的生物螢光，該螢光可通過化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行測(cè)定。
Firefly Luciferase reporter gene Assay Kit 具有靈敏度高的特點(diǎn)，可以高靈敏地檢測(cè)螢火蟲熒光素酶在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)。
保存條件
-20℃保存，有效期一年。螢火蟲熒光素酶檢測(cè)試劑建議分裝-20℃或-80℃保存。
操作流程
1.裂解細(xì)胞：將報(bào)告基因細(xì)胞裂解液充分混勻后，按如下方式加入細(xì)胞裂解液，充分裂解細(xì)胞。
（1）對(duì)于貼壁細(xì)胞：吸盡細(xì)胞培養(yǎng)液后，參考下表加入適量的報(bào)告基因細(xì)胞裂解液；
對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心去上清后，參考下表加入適量報(bào)告基因細(xì)胞裂解液。冰上孵育10 min，充分裂解細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)板 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 |
裂解液加入量 | 100 μL | 150 μL | 200 μL | 300 μL | 500 μL |
【注】：裂解產(chǎn)物可室溫保存6 h；4℃保存18 h；-80℃可長(zhǎng)期存放（裂解產(chǎn)物不能多次反復(fù)凍融），本試劑盒裂解液數(shù)量按照24孔板添加量進(jìn)行配制。
（2）充分裂解后，10,000-15,000 rpm 離心1min，取上清用于測(cè)定。（選做）
2.按儀器操作說明書開啟化學(xué)發(fā)光儀或具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光功能的多功能酶標(biāo)儀，可以設(shè)定參數(shù)為測(cè)定時(shí)間10 sec，測(cè)定間隔2 sec，或者根據(jù)儀器設(shè)備的要求并根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)置適當(dāng)?shù)拈g隔時(shí)間和測(cè)定時(shí)間。
3.每個(gè)樣品測(cè)定時(shí)，取20 μL裂解液加入測(cè)量管中（保持每次樣品的加樣量一致），取等體積的細(xì)胞裂解液作為空白對(duì)照，另外加入100 μL螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑，充分混勻后測(cè)定RLU（Relative light unit）。
4.分析數(shù)據(jù)
（1）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，在每個(gè)培養(yǎng)板中都應(yīng)設(shè)置對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組。為了保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，理論上每個(gè)實(shí)驗(yàn)組（包括對(duì)照組）都應(yīng)當(dāng)減去空白對(duì)照組的螢火蟲螢光素酶的發(fā)光測(cè)量值。
①空白對(duì)照組：
背景F：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+螢火蟲熒光素酶檢測(cè)試劑。
注：空白對(duì)照組的樣品量必須與實(shí)驗(yàn)樣品量相同，包含與實(shí)驗(yàn)樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上完全相同的檢測(cè)試劑。
②實(shí)驗(yàn)組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)化合物處理（即實(shí)驗(yàn)組F）。
③對(duì)照組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞不經(jīng)處理，用以標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果（即對(duì)照組F）。
（2）計(jì)算結(jié)果：
實(shí)驗(yàn)組=實(shí)驗(yàn)組F-背景F。
對(duì)照組=對(duì)照組F-背景F。
表達(dá)倍數(shù)=實(shí)驗(yàn)組/對(duì)照組。
注意事項(xiàng)
1. 酶促反應(yīng)對(duì)溫度較為敏感，加樣檢測(cè)前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫（20-25℃）再使用；
2. 檢測(cè)時(shí)需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相鄰孔之間會(huì)產(chǎn)生相互干擾；
3. 檢測(cè)儀器：能檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測(cè)得的光信號(hào)值也會(huì)不同；
4. 單管熒光測(cè)定儀測(cè)定，每個(gè)樣品與測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)保持一致；
5. 為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)做好有效防護(hù)；
6. 本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)！
試劑盒數(shù)據(jù)
