貨號規(guī)格

 產(chǎn)品簡介

胰蛋白酶（Trypsin）是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān)，在pH 8.0和 37℃ 時，胰酶的作用能力最強(qiáng)，因此使用胰酶時，應(yīng)把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。

一般常用胰酶的工作濃度為0.25%，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（0.05%）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca²⁺和Mg²⁺，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離，因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用，以增強(qiáng)解離效果。

本品為溶于 PBS 平衡鹽溶液的胰酶-EDTA溶液，包含2.5 g/L胰酶（1:250），0.2g/L EDTA，不含鈣鎂，經(jīng)0.22 μm 濾膜過濾處理，可直接用于細(xì)胞消化。

   產(chǎn)品信息

        使用說明

貼壁細(xì)胞的消化：

1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

2、加入少量胰酶細(xì)胞消化液（含酚紅），略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 30 秒至 2 分鐘。不同的細(xì)胞消化時間有所不同。

3、顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化，或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來；此時吸除胰酶細(xì)胞消化液；加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實驗。

4、  如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。

5、如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g 離心 1 分鐘,沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實驗。

組織的消化：

不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。

 注意事項

1、由于不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣，因此操作人員應(yīng)根據(jù)實際情況，確定最佳消化時間；消化細(xì)胞時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁和生長狀況；

2、使用本產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作，避免污染；

3、不宜長時間放置于室溫環(huán)境或 2~8℃ 長期保存；

4、2～8℃ 中解凍，搖勻后使用，切忌反復(fù)凍融，用量較少時建議分裝凍存，不可反復(fù)凍融。

5、該產(chǎn)品中的酚紅會受溶液pH值的改變而變色，在-20℃中溶液pH變酸會呈現(xiàn)橙黃色，溫度恢復(fù)后變回紅色，顏色的變化不影響正常使用；

6、本產(chǎn)品僅用于科研或進(jìn)一步研究使用，不用于診斷和治療。